ELISA試劑盒固相載體采用免疫酶技術(shù)
ELISA試劑盒固相載體采用免疫酶技術(shù)
免疫酶技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體和與標記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應底物。可作固相載體的物質(zhì)很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式，在測定過程中，它作為載體和容器，不參與化學反應，加之它的價格低廉，所以被普遍采用。
聚苯乙烯載體的形狀主要有三種：小試管、小珠和微量反應板。小試管的特點是還能兼作反應的容器，zui后放入分光光度計中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器，在洗滌過程中使圓珠滾動淋洗，效果更好。zui常用的載體為微量反應板，于ELISA測定的產(chǎn)品也稱為ELISA板，通用的標準板形是8×12的96孔式。為便于作少量標本的檢測，有制成8聯(lián)或l2聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與標準ELISA板相同。ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測，并可在特定的比色計上迅速讀出結(jié)果?，F(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量反應板型的ELISA檢測，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對操作的標準化極為有利。
良好的ELISA板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此每一批號的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔后，每孔內(nèi)加入適當稀釋的酶標抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應后分別測每孔溶液的吸光度?？刂品磻獥l件，使各讀數(shù)在0.8左右。計算所有讀數(shù)的平均值。所有單個讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應小于10%.與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯板的特點為質(zhì)軟板薄，可切割，價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時也略高。
為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣，可用以下方法加以檢驗：用其他免疫學測定方法選出一個典型的陽性標本和一個典型的陰性標本。將它們分別進行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預定的ELISA操作步驟進行測定，然后比較測定結(jié)果。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果判別zui大，這種載體就是這一ELISA測定的zui合適的固相載體。
除塑料制品外，固相酶免疫測定的載體還有兩種材料：一是微孔濾膜，如**纖維素膜、尼龍膜等，這類測定形式將在本章“膜載體的酶免疫測定”中介紹。另一種載體是以含鐵的磁性微粒制作的，反應時固相微粒懸浮在溶液中，具有液相反應的速率，反應結(jié)束后用磁鐵吸引作為分離的手段，洗滌也十分方便，但需配備特殊的儀器。
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