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輪狀病毒Elisa試劑盒為您提供PCR操作時應(yīng)注意的事項

點擊次數(shù):886次 更新時間:2017-10-27

輪狀病毒Elisa試劑盒在PCR檢測微量感染因子時,容易因為污染的而導(dǎo)致各種問題,因此,進(jìn)行PCR操作時,操作人員應(yīng)該嚴(yán)格遵守一些操作規(guī)程,zui大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)。
(1)劃分操作區(qū):目前,普通PCR尚不能做到單人單管,實現(xiàn)*閉管操作,但無論是否能夠達(dá)到單人單管,均要求實驗操作在三個不同的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區(qū)內(nèi)進(jìn)行:
① 標(biāo)本處理區(qū),包括擴(kuò)增摸板的制備;
② PCR擴(kuò)增區(qū),包括反應(yīng)液的配制和PCR擴(kuò)增;
③ 產(chǎn)物分析區(qū),凝膠電泳分析,產(chǎn)物拍照及重組克隆的制備。
各工作區(qū)要有一定的隔離,操作器材,要有一定的方向性。如:標(biāo)本制備→PCR擴(kuò)增→產(chǎn)物分析→產(chǎn)物處理。
切記:產(chǎn)物分析區(qū)的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個工作區(qū)。
(2)分裝試劑:PCR擴(kuò)增所需要的試劑均應(yīng)在裝有紫外燈的超凈工作臺或負(fù)壓工作臺配制和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放于其中,不能用來吸取擴(kuò)增后的DNA和其他來源的DNA:
① PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水;
② 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)配制;
③ 引物和dNTP應(yīng)分裝儲存,分裝時應(yīng)標(biāo)明時間,以備發(fā)生污染時查找原因。
(3) 實驗操作注意事項 盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真,在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意:
① 戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,立即更換手套;
② 使用一次性吸頭,嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
③ 避免反應(yīng)液飛濺,打開反應(yīng)管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
④ 操作多份樣品時,制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應(yīng)的度;
⑤ zui后加入反應(yīng)模板,加入后蓋緊反應(yīng)管;
⑥ 操作時設(shè)立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應(yīng)的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性;
⑦ 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,輪狀病毒Elisa試劑盒由于加樣器zui容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染,使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)該,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū);
⑧ 重復(fù)實驗,驗證結(jié)果,慎下結(jié)論。
500G    醋酸鈉,無水    ACS級    SODIUM ACETATE ANHYDROUS        
1KG    醋酸鈉,三水    ACS級    SODIUM ACETATE TRIHYDRATE        7757-83-7
2.5KG    醋酸鈉,三水    ACS級    SODIUM ACETATE TRIHYDRATE        7757-83-7
500G    醋酸鈉,三水    ACS級    SODIUM ACETATE TRIHYDRATE        7757-83-7
1KG        ACS級    POTASSIUM ACETATE        8048-52-0
2.5KG        ACS級    POTASSIUM ACETATE        8048-52-0
100G    草酸鉀    ACS級    POTASSIUM OXOLATE        10127-02-3
500G    草酸鉀    ACS級    POTASSIUM OXOLATE        
1L    丙酮    ACS級    ACETONE        10127-02-3
4L    丙酮    ACS級    ACETONE        62625-30-3
輪狀病毒Elisa試劑盒

 

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