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產品名稱 | 乳腺導管癌細胞;ZR-75-30 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63391 |
細胞名稱 乳腺導管癌細胞;ZR-75-30
形態(tài)特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: ZR-75-30源自一位47歲女性黑人更年期侵入性導管癌患者的腹水。細胞定性為人,非-HeLa,惡性乳房上皮癌起始。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
傳代方法: 1:2~1:3傳代;每周換液2~3次。
傳代情況: P40
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法(-)
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產品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生的細胞,以0.25%消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生的細胞用消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。
紅色熒光蛋白和螢光素酶標記
屬名: Bacillus velezensis3-(芐基氨基)酸乙酯Human RIC8A ELISA Kit
白化金黃地鼠肺成纖維拉丁屬名: Escherichia coli二甲基烯酸二乙二酯Human DDT(D-Dopachrome Tautomerase) ELISA Kit
豚鼠心肌拉丁屬名: Jeotgalicoccus pinnipedialis二甲基烯酸二乙二酯Human RGS5 ELISA Kit
豚鼠肺成纖維拉丁屬名: Natronobacterium nitratireducens二甲基烯酸二乙二酯Human RGS7(Regulator of G-protein signaling 7) ELISA Kit
豚鼠皮膚成纖維拉丁屬名: Aspergillus terricola六乙二一甲Human RGS9 ELISA Kit
長臂猿淋巴瘤注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用己二四甲叉膦酸(HDTMPA)Human RGSL1 ELISA Kit
家蠶拉丁屬名: Marinobacter gudaonensis己二四甲叉膦酸(HDTMPA)Human RHBDD1 ELISA Kit
樹鼩胚胎成纖維拉丁屬名: Talaromyces pinophilus2-氨基吡啶-3-甲Human RHBDL2 ELISA Kit
斑馬魚拉丁屬名: Bacillus circulans2-氨基吡啶-3-甲Human RHCG ELISA Kit
小鼠胚胎成纖維,經mitomycin-C處理,P3,300萬拉丁屬名: Lactobacillus plantarum subsp. plantarum3--7-氮雜吲哚Human RHOB ELISA Kit
小白鼠肺成纖維拉丁屬名: Aspergillus niger芐基三丁基氯化銨Human RHEB ELISA Kit
小鼠骨髓間充質干拉丁屬名: Alternaria cerasi Potebnia 芐基三丁基氯化銨Human RGS1(Regulator of G-protein signaling 1) ELISA Kit
小鼠14天胚胎成纖維注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用4-溴-2-酚Human RFXAP ELISA Kit
小鼠缺胸腺激酶L拉丁屬名: Haloferax alexandrinus4-溴-2-酚Human RGMA ELISA Kit
小鼠皮膚成纖維拉丁屬名: Rhizopus javanicus4-溴-2-酚Human RGS11 ELISA Kit
小鼠惡性肉瘤拉丁屬名: Aspergillus niger4-甲氧基硫代苯甲酰Human RFC3 ELISA Kit
小鼠精母拉丁屬名: Cryphonectria parasitica 6-氨基吡啶-2-羧酸Human RGR ELISA Kit
家貓皮膚成纖維用途: 食用兼藥用6-氨基吡啶-2-羧酸Human IFI35(Interferon-induced 35 kDa
乳腺導管癌細胞;ZR-75-30猴超敏C反應蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒Humananti-PL7-antibodyELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
猴可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒Humananti-redcellantibodyELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
猴可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒Humananti-Sa-antibodyELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
猴E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒Humananti-sp100-antibodyELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
猴腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒Humananti-typhusantibodyELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
猴α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒HumanAttacinELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
猴子白介素1(IL-1)ELISA試劑盒HumanBeta-naphtholELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
猴子單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒HumanCA724ELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。