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產(chǎn)品名稱 | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;Psi2DAP |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
貨號(hào) | EY-X63908 |
細(xì)胞名稱 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;Psi2DAP
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 這這株細(xì)胞生成一種可以感染小鼠細(xì)胞的載體。Psi2DAP細(xì)胞生成的載體編碼了人類胎盤堿性磷酸酯酶基因和*抗性基因。這株細(xì)胞通過(guò)Psi2細(xì)胞插入一個(gè)重組的逆轉(zhuǎn)錄病毒(DAP)基因組衍生而來(lái)。被這種Psi2DAP產(chǎn)生的載體感染的細(xì)胞表達(dá)的磷酸酯酶可用組織化學(xué)方法檢測(cè),可以用作體內(nèi)追蹤他們命運(yùn)的標(biāo)記。這些細(xì)胞也可能產(chǎn)生輔助病毒。檢測(cè)輔助病毒的方法或其他逆轉(zhuǎn)錄病毒技術(shù),請(qǐng)參考Cepko,C.L.Lineageanalysisandimmortalizationofneuralcellsviaretroviru
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況: PN5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
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產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括*蛋白酶、半*酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%*消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞,以0.25%*消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ,計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用*消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。
趨化因子配體3檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 珍珠龍膽石斑魚吻端組織細(xì)胞系;PGSN形態(tài)特性: 上皮樣ELISA Kit for ChemokineLigand 3
牙本質(zhì)磷蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 鞍帶石斑魚腎臟組織細(xì)胞系;GGKD形態(tài)特性: 上皮樣dentin phosphoprotein
牙本質(zhì)涎蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 草魚背鰭組織細(xì)胞系;GCDF形態(tài)特性: 上皮樣human dentin sialoprotein
順烏頭酶1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;9G2.5形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣aconitase 1
丙激酶同工酶R;L檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;H1A2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Pyruvate kinase isozymes R;L
CD320分子檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;2F8形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Cluster of differentiation 320
β2轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;F3A2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣β2 transferrin
性別決定區(qū)Y框蛋白1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;CH3形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣SOX-1
骨骼肌肌動(dòng)蛋白α1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;2F2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣smActinin-α1
α橫紋肌肌動(dòng)蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;4G1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣α-sarcomeric actin
脊髓灰質(zhì)炎病抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;1C8形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣poliovirus antibody
乙型流感嗜血桿菌抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;4F2形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Haemophilus influenzae type b antibody
腦膜炎雙球菌抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人癌多藥耐藥細(xì)胞株;MCF-7/ROS形態(tài)特性: 上皮樣Neisseria meningitidis antibody
囊泡單胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 穩(wěn)定表達(dá)GFP的shRNA靶向干擾YB-1基因人肺腺癌A549細(xì)胞株;A549/YBX1-homo-326形態(tài)特性: 上皮樣Vesicular Monoamine Transporter 2
無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員11檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 雜交瘤細(xì)胞株;1H9形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 11
5-羥色胺受體1B檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 分泌抗豬SC蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株;4H11形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣5-Hydroxytryptamine Receptor 1B
抗*抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 過(guò)表達(dá)CADM1的骨肉瘤細(xì)胞株;U-2os-CADM1形態(tài)特性: 上皮樣Anti trypsin antibody
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;Psi2DAP長(zhǎng)春質(zhì)2468-21-5英文名:Catharanthine
英文別名:(+)-3,4-Didehydrocoronaridine
CAS登錄號(hào):2468-21-5
分子式:C21H24N2O2
分子量:336.42
分子結(jié)構(gòu):
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來(lái)源:夾竹桃科植物長(zhǎng)春花Catharanthus roseus (L.)G.Don的全草
藥理藥效:止痛、消炎、安眠、通便及利尿等。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年