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人原代肝內膽管上皮原代細胞

細胞培養(yǎng)操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)

傳代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)可傳5代左右；3代以內狀態(tài)最佳

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

商品屬性：

細胞基本屬性：

種屬來源：人

組織來源：肝臟肝臟

生長特性：貼壁生長

產品規(guī)格：5x105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%胰蛋bai酶

產品貨期：7-8周左右

運輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應限制：僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

背景介紹：:人肝內膽管上皮細胞采用膠原酶灌注消化法后，再用膠原酶-DNA酶聯(lián)合消化，接種至預先包被鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶中，通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，人肝內膽管上皮細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。通過控制激素調控的分泌和吸收，在保持、調整和擴大膽小管的結構中發(fā)揮重要作用，肝內膽管上皮細胞在先天性和獲得性免疫應答方面起著積極作用。肝內膽管上皮細胞約占肝細胞總數(shù)的5%，其在肝內膽道系統(tǒng)內形成復雜的網(wǎng)狀管形結構。肝內膽管上皮細胞具有復雜的生理代謝功能，參與肝臟的代謝、排泌、免疫等生理過程，在肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起一定的作用。研究表明，常見的肝內膽管病變例如原發(fā)性硬化性膽管炎、膽管癌等疾病，都是以肝內膽管上皮細胞為病變靶位，進而引起肝內膽管上皮損傷。因此，了解正常肝內膽管上皮細胞的生物學特征和病變肝內膽管上皮細胞的病理特征對研究肝內膽管病變的發(fā)病機制、診斷和治療具有重要意義。膽管，輸送膽汁的管道。由肝分泌的膽汁，經(jīng)肝左、右管、肝總管、膽囊管進入膽囊貯存，肝內膽管的部分包括：左、右肝管；左內葉、左外葉、右前葉、右后葉膽管；各肝段膽管；小葉間膽管；毛細膽管。常見的膽管病變如膽道閉塞、原發(fā)性硬化性膽管炎、膽管癌等，都是以膽管上皮為病變靶位，因此研究膽管上皮細胞的生物學特性和病理變化有重要意義。在這些病變過程中，肝內膽管上皮常暴露于常暴露于較高炎癥因子中，會表現(xiàn)細胞損傷和繼發(fā)性增值為特征的病理變化。

原代細胞培養(yǎng)的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結締組織等?：將組織從動物體中取出，并去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當?shù)木彌_液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進行消化。消化時間可根據(jù)具體實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過濾、計數(shù)?：將消化后的細胞吹打到一個離心管中，然后過濾、計數(shù)。

五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計數(shù)后的細胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。

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